高光祖，字耀宗，１９０４年农历十一月出生于陕西省佳县店镇神堂沟村一个贫苦的农民家庭。１９１５年至１９２２年，他先后在本村私塾和店镇高小上学。
１９２３年，高光祖考入陕西省立第四师范学校（以下简称“四师”）。第二年，陕北革命领袖李子洲担任四师校长，聘请革命同仁王懋廷来校任教，立志将四师变为陕北共产主义运动的主阵地。高光祖在王懋廷等老师的影响下，阅读进步刊物，从事群众运动，１９２５年加入了中国共产党。
高光祖自投身革命后，工作非常积极。１９２５年夏，他联合绥德县泥水匠、木匠、石匠等手工业匠人，成立了绥德县手工业工人工会，使陕北工人第一次有了自己的组织。１９２６年，他和佳县旅外同学创办“振佳会”和《振佳》刊物，在家乡宣传进步思想。此外，他还参与平民学校的工作，白天上课，晚上开设党团组织训练班，为革命培训了大批骨干。
１９２６年农历六月，高光祖从绥德四师毕业，被派往蟠龙镇安定县立第四高小当教师，担任党的特别支部书记。他在这里积极发展党员，建立党的组织和农民协会。１９２７年暑假，高光祖回到佳县，参与领导中共佳县县委，并与县委书记杜嗣尧一起筹备召开了县农民协会代表大会。
大革命失败后，“土皇帝”井岳秀在陕北厉行“清党”，佳县县委解散，高光祖等人隐蔽起来。１９２７年１１月，在神堂沟村召开了全县党员代表会议，高光祖被选为县委书记。到１９３０年夏，高光祖两次担任佳县县委书记的职务，期间他还到绥德苗家坪高小教学，在双湖峪、三皇峁、周家崄一带开展党的工作，到佳县坑镇、螅镇以教学为掩护从事党的事业。１９３１年冬后，国民党对高光祖监视很严，他不便继续领导县委工作，回家种地，从事秘密活动。
１９３４年，高光祖重新回到佳县县委工作。他和曹世华一起领导红六支队，在佳县南部一带开展武装斗争。从这年冬季开始，敌人疯狂“围剿”佳县红区。在敌强我弱的形势下，为了集中力量打击敌人，１９３５年２月，高光祖与吴堡县慕生桂等协商，并经上级批准，将佳吴两县的武装力量红六、红十五支队合编为独立五团。
独立五团建立不久被调离佳吴地区，高光祖又与曹世华、马增前等人筹划成立新的红六支队。１９３５年农历二月二十日晚，高光祖等人夜宿店镇附近枣林沟村的一个山窑里，叛徒李友仁连夜去店镇向敌驻军郭福堂部告密。敌军于拂晓时将山窑包围，大声喊话，劝他们投降。高光祖等奋起抵抗，在突围中壮烈牺牲，年仅３１岁。